Introdução: A tipagem ABO é um teste essencial na rotina sorológica de Imunohematologia sendo realizado em doadores e pacientes. A tipagem direta e reversa devem ser concordantes, porém discrepâncias podem ocorrer devido à fraca expressão dos antígenos ou fraca reatividade dos anticorpos regulares anti-A e/ou anti-B. Algumas doenças podem levar a essas discrepâncias, assim como alterações moleculares no gene ABO. Algumas discrepâncias podem ser resolvidas por técnicas sorológicas complementares e o uso da biologia molecular auxilia na classificação do subgrupo e definição do grupo sanguíneo ABO. Objetivos: Avaliar o perfil sorológico e determinar molecularmente o subgrupo ABO de 2 amostras que apresentaram discrepância e reatividade atípica na rotina de tipagem ABO. Materiais e métodos: Uma amostra de sangue de doador de sangue (D1) apresentou resultado discordante entre as provas direta e reversa durante a realização da determinação do grupo ABO no equipamento automatizado Neo Immucor, sendo na direta tipada como O e na reversa como A. Uma outra amostra de sangue de paciente (P1) tipada como AB apresentou fraca reatividade do antígeno A em gel (Grifols). Testes sorológicos complementares incluíram diferentes clones de anti-A (clones F987C6, 16243G2 E 16247E6, BIRMA-1) em tubo, gel e microplaca; adsorção e eluição; tipagem direta à 4°C; tratamento da hemácia em bromelina; teste com lectinas anti-H e anti-A1. Testes moleculares incluíram a extração de DNA e sequenciamento dos exons 2 a 7 do gene ABO. Resultados: Amostra D1 apresentou resultado negativo na tipagem direta com todos os antissoros em temperatura ambiente (TA) e a 4°C, reagindo apenas através da técnica de adsorção e eluição. O sequenciamento de DNA genômico demonstrou a presença dos alelos ABO*AEL.03/ABO*O.01.02, que determinam o fenótipo Ael. A tipagem direta da amostra P1 foi reativa (1+) apenas em gel com o clone 16243G2/16247E6, e o tratamento com bromelina intensificou a reatividade (3+) com os mesmos clones. Os testes com lectina mostraram resultado negativo com anti-A1 e 3+ com anti-H. O estudo molecular revelou a presença dos alelos ABO*B.01/ABO*AW.09 que estão associados ao fenótipo Aweak B. Conclusão: Os resultados sorológicos foram compatíveis com o fenótipo deduzido do genótipo. O estudo revela a importância da utilização de diferentes clones e testes sorológicos complementares na resolução de casos com tipagem ABO inconclusivas. Embora a genotipagem ABO não seja ainda recomendada na rotina, a utilização de testes moleculares específicos auxilia na correta determinação do grupo sanguíneo ABO.