Objetivos: A triagem sorológica para HCV em doadores de sangue é realizada utilizando testes comerciais de alta sensibilidade e especificidade. Entretanto, em populações de baixa prevalência, esses testes apresentam um porcentual significativo de resultados falsos positivos causando dificuldades no aconselhamento e reentrada do doador. Nosso objetivo foi avaliar a especificidade e acurácia do ensaio utilizado na triagem sorológica e aperfeiçoar os algoritmos de testagem e aconselhamento aos doadores com testes alterados. Materiais e métodos: Estudo transversal realizado em 193.973 doações entre Junho de 2016 e Dezembro de 2017. A triagem sorológica foi realizada utilizando imunoensaio de quimiluminescência (CMIA) Architect-Abbott (anti-HCV). Os resultados foram classificados em: S/CO ≥ 1,0 = reagente; S/CO entre 0,70 e 0,99 = indeterminado (IND). O NAT-HCV foi realizado em minipools (MP) de seis amostras utilizando Kit NAT HIV/HCV/HBV-Bio-Manguinhos. As amostras com resultado reagente ou IND na triagem sorológica, isoladamente ou em associação com NAT-HCV individual positivo, foram submetidas ao ensaio confirmatório INNO-LIA HCV (Fujirebio). A acurácia do CMIA e o melhor valor de discriminação do S/CO foram verificados através da análise da curva ROC (receiver operating characteristics). Resultados: A taxa de descarte devido HCV foi de 0,3% (578/193.973). Das 578 amostras, 526 foram positivas apenas na triagem sorológica – 434 (75,1%) reagentes e 92 (15,9%) IND – 51 (8,8%) também tiveram RNA detectável, e uma amostra (0,2%) foi NAT-HCV detectável isoladamente (janela imunológica). O teste confirmatório foi realizado em 379/578 amostras que apresentavam volume suficiente para o teste: 58 IND e 321 reagentes no CMIA, sendo que 29 (7,6%) dessas amostras tinham NAT-HCV detectável. O INNO-LIA confirmou a positividade em 70/379 (18,7%) amostras, 76/379 (19,8%) tiveram resultado inconclusivo no INNO-LIA e foram excluídas da análise. A curva ROC indicou S/CO ≥ 4,32 como sendo o melhor valor discriminatório para identificar os verdadeiros positivos, sensibilidade de 90,1%, especificidade de 86,3% e uma precisão geral de 87,2%. Considerando S/CO ≥ a 1,0 e o limiar encontrado de 4,32, o valor preditivo positivo (VPP) teve um incremento de 27,34% para 66,67%. A especificidade resultante dos valores S/CO entre 0,70–0,99, ≥ 1 e ≥ 4,32 foi de 99,98%, 99,90% e 99,98%, respectivamente. Todas as 29 amostras RNA positivas apresentaram S/CO ≥ 4,32 e serviram para validação do cut-off encontrado. Nenhuma amostra S/CO < 4,32 foi NAT-HCV positivo e nenhuma amostra IND no CMIA foi positivo no INNO-LIA. Discussão e conclusão: O CMIA utilizado na triagem de doadores de sangue apresentou alta especificidade. O valor de corte S/CO ≥ 1,0 apresentou baixo VPP (27,34%). Se considerarmos o limiar de 4,32 obtido pela curva ROC o VPP sobe para 66,67%. Este limiar irá auxiliar na avaliação do retorno de doadores, possibilitando melhor reconhecimento dos verdadeiros positivos para adequado aconselhamento. Doadores com valor de S/CO abaixo do limiar provavelmente apresentam falso-positividade no CMIA e requerem investigação adicional. Esses resultados poderão trazer melhorias na orientação e aconselhamento dos doadores que apresentam testes reagentes na triagem sorológica de bancos de sangue com consequente aumento da segurança transfusional.