RHOA e RHOC são proteínas homólogas pertencentes à subfamília RHO das GTPases, desempenhando papéis centrais em processos celulares regulados pela proteína supressora tumoral p53, como ciclo celular e apoptose. RHOA e RHOC são conhecidas pela sua participação no desenvolvimento e progressão de tumores, porém as suas atuações na Leucemia Mieloide Aguda (LMA) ainda são pouco compreendidas. Neste estudo, investigamos como o silenciamento de RHOA ou RHOC afeta a expressão de proteínas reguladoras do ciclo celular e apoptose em uma linhagem celular de LMA com TP53 selvagem (OCI-AML3).

Células OCI-AML3 foram transduzidas com partículas lentivirais contendo shRNA específico para silenciamento de RHOA (shRHOA) ou RHOC (shRHOC). A eficiência do silenciamento foi confirmada por meio de western blot e RT-PCR. A expressão de proteínas de ciclo celular (p21 e ciclina E) e apoptose (BAX, BCL2, PUMA e caspase 3) foi avaliada por western blot. A densitometria das bandas foi determinada usando o software ImageJ a partir de 3 experimentos independentes.

As células OCI-AML3 shRHOA apresentaram um aumento robusto na expressão de p21 (7,5X comparadas com shCTRL). Não foram observadas alterações na expressão de p21 nas OCI-AML3 shRHOC. A expressão de ciclina E mostrou diferença entre as células shRHOA, bem como para shRHOC, quando comparadas com a controle, apresentando variações (diminuição ou aumento) de acordo com o período de análise. Entre as proteínas apoptóticas analisadas, houve maior aumento de PUMA nas células shRHOA do que em shRHOC em comparação com as shCTRL (2,4X em shRHOA e 2X em shRHOC). Não observamos alterações na expressão de caspases 3 total e clivada, BAX e Bcl2 nas células shRHOA ou shRHOC.

Os resultados do nosso estudo sugerem que a proteína RHOA participa da regulação do ciclo celular e sinalização de apoptose de células mieloides. A superexpressão de p21 em células silenciadas para RHOA indica uma parada no ciclo celular na fase G1/S. A variação na expressão de ciclina E de acordo com o tempo de coleta das células pode estar relacionada à curva de crescimento da linhagem celular. Apesar do aumento na expressão de PUMA, as caspases 3 total e clivada não foram alteradas nas células shRHOA, indicando que o processo apoptótico não se completa mediante silenciamento de RHOA. O silenciamento de RHOC foi menos impactante na expressão das proteínas estudadas, interferindo somente na expressão de ciclina E e PUMA, nas quais as células shRHOC demonstraram a mesma influência das shRHOA, porém em menor intensidade.

RHOA e RHOC, apesar de altamente homólogas, desempenham papéis distintos na regulação do ciclo celular e apoptose em linhagem celular de LMA com TP53 selvagem. O silenciamento de RHOA mostrou-se mais impactante nos processos celulares estudados.