O uso da citometria de fluxo multiparamétrica (CFM) de 4 cores para o diagnóstico e seguimento de pacientes (pcts) com neoplasias hematológicas foi estratégico para evolução do conhecimento nesta área nas últimas duas décadas. Entretanto, o refinamento da pesquisa da Doença Residual Mínima/Mensurável (DRM) nas leucemias agudas (LA) tornou necessárias medidas para aumentar a sensibilidade e especificidade do método anteriormente utilizado.

Implantar e padronizar um método de alta sensibilidade e custo-efetivo para o diagnóstico e acompanhamento de pacientes adultos ou pediátricos com leucemias agudas num centro terciário.

Estudo de coorte prospectivo longitudinal que incluiu pcts consecutivos com diagnóstico ou seguimento de leucemias agudas (LLA-B, LLA-T e LMA) atendidos pelos serviços de hematologia, hematopediatria e transplante de medula óssea do CHC-UFPR em Curitiba, Paraná, Brasil, entre janeiro/2019 e maio/2022. Foram excluídos da análise leucemia promielocitica aguda e doenças hematológicas crônicas. Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética - CAAE 84969718.0.000.0096. O consentimento para o uso de material biológico e acesso aos registros médicos foi dado pelo paciente ou guardiões legais.

O presente projeto foi realizado no âmbito do PRONON - Programa Nacional de Apoio à Atenção Oncológica, do Ministério da Saúde, que forneceu os equipamentos, reagentes e anticorpos monoclonais para a realização da DRM, conforme painéis propostos pelo grupo Euroflow. A execução financeira foi feita pela AAHC.

Para reduzir a variabilidade em todas as fases de coleta de amostras, processamento, aquisição de dados e análise, o estudo foi iniciado após reuniões educacionais com as equipes clínicas e técnicas da instituição. As amostras de medula óssea foram processadas dentro das primeiras 24 horas após a coleta. Na primeira fase foi feita implantação da técnica de lise total (bulky-lise) para as amostras com baixa celularidade; na segunda fase foram implantados os painéis de 8 cores para diagnóstico de leucemias agudas conforme proposto pelo grupo Euroflow, além da padronização do citômetro de fluxo FACS Lyric™. Na terceira fase foram validados os tubos de 8 cores para pesquisa da DRM LLA-B (Theunissen et al, 2017), DRM LLA-T e DRM LMA.

Em 40 meses foram obtidas 788 amostras/224 pcts, sendo 104 amostras de diagnóstico (46LLA-B; 52LMA; 8LLA-T), 484 amostras seguimento em diversos momentos pós quimioterapia, 43 DRM pré-TMO e 157 DRM pós-TMO.Na fase de implantação da bulky-lise demonstramos que a maioria das amostras alcançou a sensibilidade/LOD/LOQ menor que 0,001% (mais de 5.000.000 de eventos obtidos), e o uso do citômetro de fluxo de 8-10 cores foi padronizado no setor. Entre as crianças com diagnóstico de LLA, 46 (85,1%) fizeram a avaliação do D15; 42 (77,8%) d33 e 41 (75,9%) fizeram análise da semana 12; entre os pacientes com LMA a maioria realizou ao menos 2 avaliações pós quimioterapia. Os pacientes que foram submetidos ao TCTH foram seguidos para avaliação da cinética de recuperação pós transplante, e analisados em estudo específico.

A utilização dos recursos do PRONON permitiu a renovação do parque tecnológico do laboratório, como consequência houve uma melhoria evidente na pesquisa de Doença Residual Mínima, com aumento da sensibilidade e especificidade do teste em relação ao método de citometria de 4 cores. Além disso foi possível a capacitação de profissionais na área de hematologia e citometria de fluxo, com discussão dos aspectos técnico científicos e acompanhamento dos resultados, permitindo melhoria substancial no cuidado aos pacientes com leucemias agudas atendidos pelo SUS.