Introdução: O sistema Diego é composto por 22 antígenos, sendo os mais conhecidos Dia e Dib. Os anticorpos anti-Dia são geralmente de origem imune embora possam ocorrer de forma natural e são da classe IgG podendo fixar complemento e levar a hemólise. A frequência do antígeno Dia é 0,01% na maioria das populações, embora estudos relatem maior frequência em comunidades indígenas. O seu par antitético Dib possui alta prevalência chegando até em 100% em muitas populações. Objetivo: O objetivo desse estudo foi determinar a frequência do antígeno Dia e do anticorpo anti-Dia em doadores de sangue. Materias e métodos: A presença de anti-Dia foi detectada através do teste de PAI (pesquisa de anticorpo irregular) em 26.654 doadores de sangue no período de 19/03/2020 à 01/06/2020 utilizando equipamento automatizado Neo-Immucor®. Para detectar o antígeno Dia foram realizados testes de compatibilidade com 2.173 doadores do grupo sanguíneo O utilizando plasma de doador com anti-Dia com título 2 em cartão gel/Liss Coombs Grifols.A presença do antígeno Dia foi confirmada com antissoro comercial (Lorne).As amostras Di(a+) foram testadas por Biologia Molecular através da técnica de PCR-RFLP para determinar a frequência dos alelos DI*A/DI*B. Resultados: Dos 26.654 testes de PAI realizados, 96 apresentaram resultado positivo, dos quais, 5 (5,2%) foram identificados com a especificidade anti-Dia. No mesmo período foi investigada a presença do antígeno Dia em 2.173 doadores sendo que 54 apresentaram o fenótipo Di(a+), oque correspondeu a 2,5% da população testada. Através da biologia molecular todos os doadores testados apresentaram o genótipoheterozigoto DI*A/DI*B. Conclusão: A frequência do antígeno Dia observada neste estudo foi menor do que relatado em estudos realizados em diversos estados brasileiros (3%–40%), provavelmente devido à baixa frequência de indivíduos de origem indígena na população de doadores de sangue de São Paulo. Apesar do anti-Dia ser um anticorpo dirigido a um antígeno de baixa frequência, 5,2% dos plasmas de doadores com PAI positivos da nossa instituição apresentaram o anticorpo anti-Dia.