O heme é uma molécula fundamental para o ser humano, mas fora da célula ele se torna tóxico, podendo levar a uma série de complicações, como a ativação da coagulação. A hemopexina (HPX) é uma proteína circulante responsável por remover o heme livre da circulação, liberado principalmente em condições hemolíticas. Doenças onde há muita hemólise levam a uma sobrecarga de heme livre, causando um consumo da HPX. O uso de vetores virais baseados em vírus adeno-associado para expressar proteínas ausentes ou disfuncionais tem se tornado uma estratégia atraente para o tratamento de diversas doenças. Nosso objetivo foi desenvolver um vetor viral baseado em um vírus adeno-associado que expressa HPX humana e testar sua eficácia e segurança em um modelo animal de sobrecarga de heme livre.

Um vetor AAV-8 foi produzido contendo a sequência de cDNA completa de HPX humana (hHPX). Os camundongos foram injetados com doses crescentes de 2 × 1012, 1 × 1013 e 2 × 1013 genomas de vetor/kg, enquanto um grupo de controle recebeu um vetor vazio (empty). O sangue foi obtido a cada duas semanas para dosagem da hHPX por ELISA. A expressão também foi confirmada em amostras de fígado obtidas após 6 semanas da infusão e a atividade funcional avaliada por desafio com heme e hemólise induzida por fenilhidrazina.

A expressão de hHPX no fígado foi confirmada por RT-PCR e Western blot. A expressão sustentada de hHPX foi observada até 58 semanas no plasma. A expressão foi dependente da dose e não associada a sinais clínicos de toxicidade. Os níveis de hHPX foram significativamente reduzidos por infusões de heme e hemólise induzida por fenilhidrazina. Nenhuma toxicidade clínica ou sinais laboratoriais de dano hepático foram observados em estudos preliminares de curto prazo de desafio com heme.

Nossos resultados sugerem que a hHPX expressa pelo nosso vetor é capaz de remover o excesso de heme livre na circulação, baseado na diminuição de seus níveis.

A expressão a longo prazo de hHPX pode ser alcançada com vetores AAV em camundongos. Estudos adicionais são necessários para confirmar o efeito biológico da proteína transgênica e seu efeito em modelos animais de hemólise crônica.