A infusão de Células Progenitoras Hematopoiéticas (CPH) não criopreservadas tem sido proposta como uma alternativa rápida, econômica e com menos efeitos colaterais adversos, porém, a manutenção da viabilidade e capacidade proliferativa dessas células sob refrigeração precisa ser avaliada durante o tempo. Para isso, ensaios de viabilidade das células CD34+ e formação de CFU-GM (colônias de granulócitos e monócitos) têm sido realizados. Nesse estudo, nosso objetivo foi comparar os dados de viabilidade celular e resultado de CFU-GM em produtos de aférese refrigerados por 48h com o referencial recém coletado (fresco).

Foram avaliadas amostras refrigeradas por 48h de 7 pacientes previamente submetidos ao esquema de mobilização de CPH, para posterior realização de transplante de CPH autólogo. Comparamos as amostras de produtos refrigerados por 48h com seus referenciais a fresco. As amostras refrigeradas por 48h foram mantidas na concentração de 1 × 108 células/mL, e foram também anticoaguladas com heparina sódica na proporção de 20 UI/mL de produto total. O ensaio de viabilidade das células CD34+ refrigeradas foi realizado por citometria de fluxo, através da análise da expressão do marcador 7AAD. O ensaio clonogênico foi feito sobre duas camadas: a camada base, que contém meio Iscove's modificado, soro fetal bovino e ágar 1,8%, e a camada celular, que além destes componentes, são adicionados o meio condicionado da linhagem 5637, como fonte de fatores de crescimento hematopoiéticos. Foram plaqueadas 2000 células CD34+ no teste de refrigeração. As culturas foram mantidas em estufa a 37°C, com 5% CO2 durante 14 dias. Colônias com mais de 50 células foram quantificadas em microscópio invertido. Para estabelecer a relação entre células CD34+ e CFU-GM, utilizamos a quantificação de células CD34 recomendada pela ISHAGE. Os dados foram analisados de forma pareada (Teste t) pelo GraphPad Prism versão 5.

A mediana de idade dos pacientes foi de 59 anos. Nos produtos refrigerados a mediana de CD34+x106/kg foi de 4,42 células (0,5 – 11,72) e o percentual de células mononucleadas nos produtos de aférese foi de 85,5% (79 – 92). Nos ensaios de viabilidade, as amostras recém coletadas não apresentaram diferença quando comparadas com os produtos refrigerados por 48h (p = 0,1180). A relação CD34/CFU-GM entre amostras frescas e refrigeradas por 48h não teve diferença estatística significativa (p = 0,5046).

Nossos dados mostraram que tanto a viabilidade quanto a capacidade proliferativa não foram afetadas pelo intervalo de 48h sob refrigeração, nas condições testadas. Novos ensaios precisam ser realizados a fim de comprovar todos os parâmetros de validação.

É sabido que várias condições, como a concentração celular e os processos de anticoagulação, interferem na qualidade final do produto processado. Sendo assim, cada laboratório deve estabelecer a melhor estratégia a ser adotada de modo a garantir segurança em cada etapa do processo.