A determinação do perfil de antígenos eritrocitários em doadores de sangue e pacientes que recebem transfusão sanguínea é importante na prevenção da aloimunização. Para a detecção desses antígenos é realizada a técnica convencional de fenotipagem eritrocitária. Quando essa técnica apresenta limitações, seja devido a expressão fraca ou alterada dos antígenos, ou em paciente politransfundido, é necessário a implantação de técnicas de amplificação de ácidos nucleicos. O objetivo deste estudo foi comparar as técnicas de fenotipagem e genotipagem eritrocitária realizadas em voluntários da Universidade Estadual de Ponta Grossa.

Foi realizado um estudo observacional transversal com indivíduos da comunidade universitária. Foram realizadas 37 fenotipagens, pela metodologia de aglutinação em coluna-gel-teste, para antígenos dos sistemas Rh e Kell. Foram selecionados 4 indivíduos, os quais possuíam os fenótipos de relevância a serem estudados, sendo eles: Rhccee, RhCCee, K-k+, K+k+. Posteriormente, foi realizada a extração e quantificação de DNA seguido de amplificação por meio de PCR alelo específico (PCR-AS), e revelação por eletroforese em gel para os antígenos do sistema Rh (C, c, E, e) e do sistema Kell (K, k).

A distribuiçãodos fenótipos do sistema Rh e Kell encontrados neste estudo foram: 2 (50%) indivíduos RhCCee, 2 (50%) indivíduos Rhccee, 3 (75%) indivíduos K-k+ e 1 (25%) indivíduo K+k+. A genotipagem realizada por PCRAS apresentou os resultados concordantes ao da fenotipagem.

A PCR convencional realizada neste estudo gerou resultados 100% condizentes com a fenotipagem anteriormente realizada. A PCR convencional é um método qualitativo, e o produto dessa reação é visualizado por meio da eletroforese, técnica usada para separar fragmentos de DNA com base no tamanho e carga, sendo revelado em luz UV. Deve ser ressaltado que como alternativa para PCR convencional existe a PCR em tempo real que permite a monitorização em tempo real da amplificação, que é baseado na detecção e quantificação de um composto fluorescente que aumenta proporcionalmente a quantidade de material genético que está sendo amplificado. A PCR em tempo real vem sendo muito utilizada por ser quantitativa, precisa, sensível, rápida e com maior reprodutibilidade. Além disso, essa técnica não  possui processamento pós-PCR, minimizando as chances de contaminação cruzada, mas tendo como desvantagem o alto custo do equipamento. Realizar a genotipagem de maneira precisa dos principais antígenos eritrocitários garante segurança transfusional, tendo em vista o potencial que a imunogenicidade tem para acarretar reações transfusionais hemolíticas e doença hemolítica perinatal.

Os resultados do presente estudo demonstram a equivalência entre a fenotipagem e a genotipagem, realizada pela PCR convencional, nos indivíduos avaliados. No entanto, realizaremos estudos futuros com maior número de amostras e antígenos eritrocitários para que determinemos a especificidade, sensibilidade e reprodutibilidade dos testes. Além disso, analisaremos métodos de genotipagem alternativos, como a PCR em tempo real em equipamento QuantStudio 5 (ThermoFisher) recentemente adquirido, que  permitirá um procedimento mais rápido, preciso e seguro, visando a aplicação de novos métodos de diagnóstico na rotina imuno-hematológica.