O sistema ABO possui uma grande quantidade de fenótipos fracos e subgrupos causados por polimorfismos presentes tanto na região genômica referente ao domínio catalítico da transferase, quanto nas demais regiões codificadoras do gene ABO. Entretanto, algumas amostras com alteração na expressão dos antígenos ABO não apresentam mutação nas regiões codificadoras e sítios de splicing. Outra região genômica pouco explorada que pode interferir na expressão gênica é o elemento regulatório GATA eritróide-específico localizado no íntron 1. No presente estudo nós investigamos através de técnicas sorológicas e moleculares uma amostra com alterações na expressão do antígeno B sem polimorfismos nas regiões codificadoras.

A tipagem ABO foi realiza em tubo, microplaca e gel. A amostra foi testada com lectina anti-H e testes adicionais de adsorção em temperatura ambiente e à 4°C foram realizados. Foi realizada extração de DNA e sequenciamento de Sanger de todos exons, região promotora e intron 1. O sequenciamento do exon 7 também foi realizado a partir da PCR alelo específica para o alelo ABO*B.

Nas 3 metodologias, a tipagem direta apresentou resultado negativo com anti-A e anti-B, enquanto que as provas reversas detectaram apenas a presença do anti-A. O teste com anti-H apresentou reatividade de 4+. Através da adsorção/eluição à 4°C foi possível detectar com reatividade fraca a presença do antígeno B. O sequenciamento do exon 7 apresentou as mutações responsáveis pelo alelo ABO*B em heterozigose, além dos polimorfismos: c.646T/A; c.681G/A; c.771C/T; c.829G/A. Através do sequenciamento dos outros exons e do exon 7 utilizando uma PCR ABO*B alelo-específica, observamos apenas os polimorfismos característicos deste alelo, sendo identificado neste momento como  um alelo ABO*B normal. Com os resultados do sequenciamento dos outros exons, foi possível identificar um alelo ABO*O.01.02 (exon 3: c.106G/T; exon 4: c.188G/A, c.189C/T; exon 5: c.220C/T; exon 6: c.261G/delG, c.297A>G). O sequenciamento do intron 1 revelou a presença da mutação c. c.28+5890T/G, localizada no sítio de ligação GATA. Com os resultados moleculares concluímos o genótipo ABO*O.01.02/ABO*B(IVS1+5890G).

A mutação encontrada no elemento regulatório GATA eritróide-específico reduz a atividade transcricional no alelo B, levando à redução da expressão do antígeno B nas células de linhagem eritróide. O fenótipo Bm está relacionado a esta mutação, o que é coincidente com os achados sorológicos. Embora a genotipagem ABO seja desafiadora e pouco utilizada, a utilização de testes moleculares específicos auxilia na correta determinação do grupo sanguíneo ABO.