Pedroso e Soler contribuíram igualmente para o trabalho.

Descrevemos aqui deleção talassêmica α0 nova, detectada em uma criança de 3 meses do sexo feminino, branca, proveniente da cidade de Mococa (SP), encaminhada para investigação de talassemia α após detecção de hemoglobina (Hb) Bart's em triagem neonatal.

Índices hematimétricos realizados a partir de sangue periférico coletado da criança e pais (XN-3000, Sysmex). Análises proteicas: eletroforese de Hb em acetato de celulose (pH alcalino e neutro) e cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) de troca catiônica (Variant II, Bio-Rad). Análises moleculares a partir de DNA genômico extraído de leucócitos (QIAamp DNA Blood, Qiagen): Multiplex-gap-PCR para triagem das deleções mais comuns de talassemia α e Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification (MLPA) para investigação de deleções raras (SALSA MLPA P140-HBA, MRC Holand). Também foi realizado o sequenciamento de DNA pelo método de Sanger (ABI PRISM 3500, Applied) e por NGS (NextSeq1000, Illumina).

A criança apresentava anemia microcítica e hipocrômica com discreta reticulocitose e presença de Hb Bart's (17,3%) e Hb H (6,1%). Seus pais apresentavam alterações hematológicas sugestivas de talassemia (microcitose e hipocromia) sem anemia. Multiplex-gap-PCR revelou homozigose da deleção -α3.7 na criança (-α3.7/-α3.7), heterozigose na mãe (αα/-α3.7) e não foram detectadas mutações no pai. Devido à incompatibilidade genotípica / fenotípica da criança, bem como genótipo paterno aparentemente normal realizou-se a técnica de MLPA, que detectou, em um dos alelos, extensa deleção de 10,6 à 20,3 Kb correspondente à remoção de 19 sondas, em que foram deletados os genes HBM, HBA2 e HBA1, enquanto permaneceram os genes HBZ, HBZP e HBQ e o elemento regulatório do cluster α, tanto na criança quanto no pai. Particularmente na criança, esta deleção foi detectada em trans à deleção -α3.7 (–/-α3.7), compatível com o fenótipo de doença da Hb H. A região 5do breakpoint da deleção localiza-se entre o gene HBZP e o gene HBM, enquanto a região 3está entre o gene HBA1 e o gene HBQ . Para a efetiva caracterização dos breakpoints, foi realizado Long-PCR com primers que flanqueiam a deleção. O fragmento de aproximadamente 4,0 Kb foi posteriormente sequenciado por sequenciamento direto de Sanger, o que permitiu determinar a extensão da deleção (17.067 pb), bem como dos breakpoints . Devido a uma divergência entre o tamanho do amplicon resultante da reação de Long-PCR esperado (3,2 Kb) e o encontrado (4,0 Kb), realizou-se o sequenciamento do fragmento por NGS . Constatou-se que a diferença é resultante da inserção/polimorfismo de aproximadamente 32 repetições de 37 pb na região upstream ao breakpoint, uma região altamente polimórfica. Estas alterações foram encontradas tanto na criança como em seu progenitor.

O ponto de corte/ligação da deleção está localizado em duas regiões homólogas (posições 16:152,039-152,058 e 16:169,106-169,125#), nas quais há uma sequência de 20 nucleotídeos comum a ambas (GCCTGTAATCCCAGCTACTC), o que leva à hipótese de que a deleção foi gerada a partir de um crossover desigual entre essas duas regiões.

De nosso conhecimento, esta deleção não corresponde a outras previamente descritas. Nós a denominamos –Mococa, cidade localizada na região sudeste do Brasil de onde a família portadora é proveniente. #Genbank NG_000006.1