Avaliar a diferenciação celular de Células de Veia de Cordão Umbilical Humano (HUVECs) em tecido vascular após exposição a Hormônio Derivado de Plaquetas (HDP).

Com a obtenção do concentrado plaquetário, foi realizado no sexto dia de conservação a ativação das plaquetas (Hemocultura BactAlert®negativa) com norepinefrina 0,1% 25 mM, congelamento/descongelamento em Banho-Maria a 37°C e submetido à centrifugação para a eliminação de debrie. O material obtido foi denominado HDP, posteriormente dosado pela técnica Luminex Magpix Millipore™com os marcadores: PDGF- AA, RANTES/CCL5, PAI-1 (total), VEGF-A, FGF-1/FGF-acidic, FGF-2/FGF-basic, EGF, Angiopoietin-2, Fibrinogen e Fator von Wilebrand (vWF). Com o hormônio extraído foram semeadas 2,1×10̂6 células em um frasco T-75 com 10 mL meio DMEM-F12 com 4 mM de L-glutamina, 4500 mg/L de glicose, 1 mM de piruvato de sódio, e 1500 mg/L de bicarbonato de sódio +10% de Soro Fetal Bovino (SFB), hidrocortisona (5 uL/mL) ácido ascórbico (50 ug/mL), Heparina (90 ug/mL),seguida de incubação por três dias em observação microscópica periódica constante. Após atingir confluência de aproximadamente 80% do frasco as células foram lavadas, tratadas com Tripsina-EDTA e contadas na câmara d Neubauer na presença de azul de trípano. Em seguida, foram diluídos e homogenizados 10.000 de células em 100 uL de buffer salino de fostato e depositados em tubos de citometria, seguida da adição de marcadores CD44, CD90, CD31, CD34, CD105, CD106, HLA Classe II, CD73, CD14 e CD36. Após incubação por 30 minutos em ambiente livre de luz foi adicionado 400 uL de tampão Isoton™, as amostras foram centrifugadas a 3000 rpm por cinco minutos, lavadas com Isoton™, suspendidas em 500 uL de tampão iso-osmolar e direcionadas para a citometria de fluxo.

Fora observado um perfil fenotípico próximo ao observado em células endoteliais, porém com desvios nas tendências tradicionais dessas células. Evidência do comportamento atípico são as respostas obtidas nos marcadores: CD44+, CD13+, CD31+, CD34+ e CD104 (neg), CD015 (neg), CD73 (neg), CD14 (neg). Consequentemente, é possível observar um perfil ambíguo dessas células, uma vez que marcadores de adesão celular apresentam uma elevada presença, enquanto a sinalização de formação de vasos sanguíneos ainda se apresentou baixa.

A concentração de hormônio influenciou de maneira ambígua o desenvolvimento celular, gerando uma elevada síntese de proteínas de adesão, prejudicando o número de eventos a serem avaliados. Entretanto, a alta presença de proteínas não se traduziu na especialização das células endoteliais em vasos sanguíneos, evidente pela marcação negativa de CD105 e CD106.

Os hormônios impactaram positivamente na síntese proteica e dão indícios de favorecimento da especialização celular, ainda que não foram obtidos valores significantes de leituras, sendo necessário repetir o ensaio com um maio número de eventos.