O linfoma de Burkitt (LB) é uma neoplasia linfoide de células B maduras do centro germinativo. Devido à agressividade dessa doença, o tratamento deve ser iniciado rapidamente, a fim de evitar o acometimento do sistema nervoso central (SNC). Assim, apesar da inovação da indústria farmacêutica, essa doença possui altas taxas de recidiva e mortalidade. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi investigar os principais mecanismos de morte celular, causados pelo DSH65, um composto sintético, da classe das imidazopiridinas.

Para a avaliação da citotoxicidade do composto foram realizadas curvas de concentração e tempo resposta em células de linhagem de LB (Daudi) pelo método do MTT. Para isso, as células foram incubadas em diferentes concentrações (1 - 100 μM) e tempos (24, 48 e 72 horas), e a concentração inibitória 50% (CI50) foi determinada por meio de regressão linear. Todos os resultados foram expressos como média ± erro padrão da média. A fim de avaliar o mecanismo de morte celular causada pelo composto, foram utilizadas duas metodologias: avaliação da morfologia das células coradas com brometo de etídio (BE) e laranja de acridina (LA) por microscopia de fluorescência e avaliação da exposição dos resíduos de fosfatidilserina na membrana celular por citometria de fluxo (CF) pelo método da anexina-V. A perda do potencial de membrana mitocondrial (Δψm) e o aumento de espécies reativas de oxigênio (EROs) foram avaliadas por CF. Para avaliar o envolvimento das proteínas pró-apoptóticas Bax, anti-apoptóticas Bcl-2, AIF, FasR, Caspase-3 ativada, survivina, Ki-67 na morte celular causada pelo composto DSH65 foi empregado a CF.

O DSH65 apresentou CI50 de 50,14 ± 3,14 μM, 17,62 ± 0,87 μM e 13,12 ± 0,71 μM em 24, 48 e 72 h, respectivamente. A morte celular causada por apoptose após incubação com o composto DSH65 foi confirmada por meio da morfologia celular e pela identificação da externalização de resíduos de fosfatidilserina por citometria de fluxo. Os resultados mostraram que o composto DSH65 causa morte celular por apoptose intrínseca, pois houve aumento da relação Bax/Bcl-2, perda do potencial de membrana mitocondrial (Δψm) e ativação de caspase-3. A incubação com o composto DSH65 também diminuiu a expressão da proteína de resistência survivina e do marcador de proliferação celular Ki-67. Além disso, o composto também aumentou a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs).

Os resultados obtidos mostram que o composto DSH65 causa morte celular por apoptose, como apresentados pela microscopia com coloração com BE e LA e pela externalização dos resíduos de fosfatidilserina avaliados pelo método da anexina-V. O composto também causou dano mitocondrial, observados pelo aumento de EROs e perda do potencial de membrana mitocondrial. Dessa forma, o dano celular causado pelo composto foi o resultado do aumento da proteína apoptotica Bax e diminuição da anti-apoptótica Bcl-2, que resultou na ativação da caspase-3, principal caspase envolvida no processo de morte celular por apoptose, e está envolvida tanto na apoptose intrínseca quanto extrínseca. Também houve diminuição de proteína de resistência survivina, que quando aumentada, contribui para resistência celular aos quimioterápicos.

A partir do conjunto de resultados apresentados, sugere-se que o composto é um bom candidato para o desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento do LB.