O objetivo deste trabalho foi utilizar plaquetas humanas na produção de lisado plaquetário, dosar diferentes hormônios plaquetários para utilização em técnicas de cultura celular promovendo a diferenciação de HUVECs com a formação de neovasos por meio de um produto derivado de concentrado plaquetário.

Após a obtenção do concentrado plaquetário foi realizado o processo de ativação e lise plaquetária em bolsas no sexto dia de conservação (Hemocultura BactAlert® negativa), seguidas da ativação com norepinefrina 0,1% 25mM, congelamento/descongelamento em Banho-Maria a 37°C e submetido à centrifugação para a eliminação de debris. O material obtido foi denominado HDP, posteriormente dosado pela técnica Luminex Magpix Millipore ™com os marcadores: PDGF- AA, RANTES/CCL5, PAI-1 (total), VEGF-A, FGF-1/FGF-acidic, FGF-2/FGF-basic, EGF, Angiopoietin-2, Fibrinogen e Factor (vWF). O cultivo celular foi feito em 10 mL meio DMEM com 4 mM de L-glutamina, 4500 mg/L de glicose, 1 mM de piruvato de sódio, e 1500 mg/L de bicarbonato de sódio + 10% de Soro Fetal Bovino (SFB), optou-se pela adição de hidrocortizona (5 uL/mL) ácido ascórbico (50 ug/ml), Heparina (90 ug/mL). O preparo dos frascos foi feito com o plaqueamento de de HUVECs em 3 frascos T75cm distintos denominados CTRL, HDP e HDP-T. O frasco de controle (CTRL) não contendo hormônio, o frasco denominado HDP contendo o lisado plaquetário e o frasco HDP-T fora tratado com trombina bovina a 37°C para obter um extrato de lisado plaquetário livre de proteínas de coagulação após processamento do coágulo de fibrina. Durante o cultivo fora ministrado 3 mL de HDP e HDP-T nos frascos respectivos, completados com 10 mL de DMEM 10% SFB e os aditivos mencionados previamente, o frasco de controle somente 10 mL de DMEM fora adicionado. Os fracos foram mantidos em incubadora durante 3 dias, com avaliações periódicas em microscopia óptica invertida a cada 24 hrs.

A análise do frasco HDP-T obteve-se o maior crescimento celular, atingindo confluência de 80% em menos de 48 hrs de cultivo. O fraco HDP apresentou crescimento semelhante, atingindo 80% de confluência pouco após 48 hrs. Não obstante, foi observado a formação de clusters celulares de difícil dissociação quando postos em contato com tripsina-EDTA em todos os fracos, sendo excessivamente presentes nos frascos contendo hormônio. As HUVECs alteraram sua morfologia, inicialmente se aproximando da descrita em literatura e após 3 dias de cultivo apresentaram sinais de estresse/senescência celular e morfologia multilobular com presença precipitados.

A concentração de hormônios presentes no lisado plaquetário impactou de maneira positiva a formação de vasos promovendo a especialização celular, evidenciado visualmente por microscopia óptica invertida e comprovado por citometria de fluxo. Houve uma excitação na produção de proteínas de adesão celular, evidente pela formação de clusters durante a tripsinização, um possível resultado da redução do estresse oxidativo pelo ácido ascórbico e retardo inflamatório pela hidrocortizona somada a interação entre heparina e VEGF promoveu a diferenciação celular.

Foi obtida uma especialização celular efetiva para formação de neovasos, um crescimento celular exacerbado e uma tendência a formação de clusters.