A classificação sanguínea ABO na maioria dos casos é definida de forma simples através da realização da tipagem direta (detecção do antígeno) e tipagem reversa (detecção dos anticorpos). Para definição do grupo sanguíneo (GS) é essencial haver concordância entre ambos os testes. A discordância pode acontecer em situações específicas como a presença de anticorpos frios, o enfraquecimento patológico de antígenos ou de anticorpos ou por herança genética como é o caso dos subgrupos. Os laboratórios de imuno-hematologia necessitam de protocolos para investigação dos casos de discrepância ABO.

O laboratório de imuno-hematologia recebeu a amostra de uma puérpera (G1P1) sem histórico transfusional para avaliação de discrepância ABO. Pela tipagem direta o GS era O e pela reversa B. Ao repetirmos os testes em gel-teste observamos o mesmo resultado. Partimos para tentativa de evidenciar a presença do antígeno B nas hemácias da paciente. Iniciamos o protocolo de investigação seguindo os seguintes passos: 1°: tipagem direta e reversa em tubo com incubação de 15 minutos a 4oC; 2°: realização de 2 provas cruzadas (gel/Liss/Coombs) utilizando o plasma de um doador do grupo O e de um do grupo A com títulos de aglutinina ≥100; 3°: Realização de 2 adsorções de anticorpos em paralelo utilizando plasma de um doador O e de um A com incubação de 30 min a 4oC seguida da eluição de anticorpos pelo congelamento e descongelamento (método de Lui) das 2 hemácias utilizadas na adsorção; 4°: testagem dos eluatos com hemácias A1 e B por teste de aglutinação direta em tubos; 5°: realização de 2 adsorções de anticorpos em paralelo utilizando plasma de um doador O e de um A com incubação de 30 min a 37oC seguida da eluição de anticorpos utilizando a glicina ácida nas 2 hemácias utilizadas para adsorção; 6°: testagem dos eluatos com hemácias A1 e B na técnica de gel/liss/Coombs. Não houve mudança no resultado dos testes após a incubação dos tubos a 4oC. Os resultados das provas cruzadas utilizando os plasmas A e O foram negativos. Os resultados das 2 eluições pelo método de Lui foram negativos. Os resultados das eluições das hemácias incubadas a 37oC foram: negativo com as hemácias A1 e positivo 2+ com as hemácias B.

A incubação dos testes a 4oC visava aumentar a fixação dos anticorpos IgM anti-B dos reagentes de tipagem ABO buscando a evidência do antígeno B. A adsorção a 4oC seguida eluição pela técnica de Lui visava evidenciar a presença de anticorpos IgM anti-B contido nos plasmas O e A se houvesse a presença do antígeno B. Estes testes não foram eficientes para esclarecer o caso. A adsorção a 37oC seguida da eluição pela glicina ácida visava evidenciar os anticorpos anti-B IgG se o antígenos B estivesse presente nas hemácias da amostra estudada. O resultado negativo com hemácias A1 mostrou a ausência do antígeno A e o resultado positivo com hemácias B mostrou a presença do antígeno B.. O antígeno B só foi evidenciado pela técnica de fixação e eluição de anticorpos anti-B IgG definindo o grupo sanguíneo da paciente como Bel. Este subgrupo Bel é raro e está associado a mutações genéticas específicas no gene B como 502C->T. Isto determina a produção de uma transferase B menos efetiva determinando menor produção do antígeno B. Embora as reações transfusionais relacionadas a subgrupos não sejam frequentes, a detecção de subgrupos ABO é muito importante na medicina transfusional.

International Society of Blood Transfusion. Names for ABO (ISBT 001) blood group alleles.