O uso de meio condicionado, secretoma, de células tronco tem se consolidado como uma ferramenta promissora e eficaz para uma gama importante de aplicações. A produção de anticorpos monoclonais murino baseado na tecnologia hibridoma, utiliza na fase inicial, camadas de células alimentadoras, as denominadas feeders cells como adjuvante na produção de um meio promotor da cicatrização da membrana celular e promotora de crescimento dos híbridos recém-criados. A limitação deste tipo de técnica, tem sido cada vez mais, o número de animais de baixa idade (15-20 dias) de vida, sacrificados para se obter o timo. Diante disto, e do alto custo de meios xeno-free no mercado, este projeto se propôs a avaliar a contribuição de meio condicionado obtido de células tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo murino (MC-CTtam) na efetividade da fusão celular comparando com método clássico (feeder cells). A obtenção do MC-CTtam foi realizada a partir da obtenção de fragmento de tecido adiposo (1 g) da prega inguinal de camundongos Balb-C (3 animais). A amostra de tecido foi digerida por colagenase tipo I e procedido o plaqueamento e cultura na presença de DMEM-F12 aditivado. As células foram expandidas até se obter 2 × 107 células/mL entre segunda e quarta passagens. As CTM foram caracterizadas por citometria de fluxo utilizando FACS Calibur e software Cell Quest Pro com painel de CD11b, CD45, CD34, CD73 e CD90. Foi procedida a diferenciação em trilinhagem (adipocítica, osteogênica e condrogênica) para comprovação do perfil de CTM. Após a caracterização, CTMtam foram expandidas em cultura, tendo sido realizado wash out para remoção de resquícios de vermelho fenol e de soro fetal bovino. Após isto, 2 × 107 células foram plaqueadas em frascos T-25 cm2 e mantidos em condições ótimas de cultura por 48 horas, a partir do qual o MC-CTMtam foi coletado e submetido à dupla centrifugação: baixa rotação e ultra centrifugação a 100.00 g. As feeders cells controle (timócitos de camundongos recém-nascidos) foram obtidos após timectomia e dissociação mecânica do timo. Após 48 horas da fusão celular, os protocolos foram executados com cada um dos aditivos e observado o aspecto da cultura e a identificação de híbridos secretores de imunoglobulinas. No protocolo clássico (controle) foram gerados 1300 híbridos com uma eficiência de fusão de 33, 61% e naquele usando MCCTtam outras 1400 células.com uma taxa de 69,71% O meio condicionado obtido de células tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo murino (MC-CTtam) se mostrou efetivo como aditivo de fusão celular quando comparado com método clássico (feeder cells). O MC-CTtam deve despontar como produto de base tecnológica, como substituto de células do timo de camundongos recém-nascidos.