Paciente do sexo masculino, 71 anos, natural da cidade de Cardoso/SP, portador de cardiopatia chagásica há 8 anos, realizou transplante cardíaco em abril de 2021. Em 14 de junho/2021 procurou pronto atendimento com quadro de bacteremia e febre, internou para investigação de febre persistente sendo tratado com antibioticoterapia. Paciente mantém febre e calafrios apesar do tratamento com antibióticos e persistindo com hemoculturas negativas. Foi solicitado exames laboratoriais de urgência. Em avaliação do esfregaço de sangue periférico do hemograma observou-se inúmeras formas tripomastigotas do Trypanossoma cruzi . Após 7 dias de internação paciente evoluiu com quadro de parada cardiorrespiratória sem resposta às manobras de ressuscitação cardiopulmonar. A amostra do paciente foi enviada ao setor de Biologia Molecular do nosso laboratório para padronização da técnica de detecção molecular de Trypanossoma cruzi .  Foi realizada a extração do DNA a partir de sangue total e plasma coletados em EDTA, em equipamento automatizado. Seguiu-se com a amplificação do alvo pela técnica de PCR em tempo real, utilizando par de primers e sondas Taqman desenvolvidos em nosso laboratório, usando bancos de dados de referência do NCBI. Amplificamos também amostras negativas além de amostras de água (NTC – no template control), para controle da reação.  Tanto na amostra de sangue quanto de plasma do paciente, a reação mostrou-se eficaz na detecção do DNA do patógeno. O desenvolvimento dessa nova técnica possibilita a detecção rápida e eficaz do Trypanossoma cruzi e poderá ser aplicado na rotina laboratorial, auxiliando no diagnóstico da Doença de Chagas.