As proteínas Rac1, Rac2 e Rac3 pertencem à família de proteínas Rho GTPases, que é tradicionalmente conhecida pelas suas funções na regulação do citoesqueleto. Estas proteínas estão envolvidas na regulação de diferentes funções de células hematopoiéticas, como entrada e saída de células-tronco hematopoiéticas na medula óssea e maturação das células sanguíneas. Apesar destas propriedades celulares estarem desreguladas em leucemia mieloide aguda, as funções das proteínas Rac1, Rac2 e Rac3 ainda não foram exploradas nesta doença.

Neste estudo avaliamos os efeitos do tratamento com EHT-1864, um inibidor farmacológico de Rac1, Rac2 e Rac3, na via PI3K/AKT/mTOR em linhagem leucêmica OCI-AML3. Os efeitos da combinação de EHT-1864 e daunorrubicina, um dos fármacos já utilizados no tratamento da LMA, também foram avaliados na sobrevivência destas mesmas células.

A expressão de proteínas da via PI3K/AKT/mTOR foi avaliada por western blot em células OCI-AML3 tratadas com EHT-1864 (0,5-30μM) por 48 e 72 horas. A expressão de GAPDH foi utilizada como normalizadora. Os efeitos do tratamento combinado de EHT-1864 (5μM e 10μM) com daunorrubicina (1-200M) por 48 e 72 horas foram avaliados na viabilidade e apoptose de células OCI-AML3. Para isso, as células foram tratadas com os fármacos sozinhos ou em combinação e avaliadas por ensaio de MTT e marcação de anexina V e iodeto propídeo seguida de análise por citometria de fluxo.

O tratamento com EHT-1864 inibiu a via PI3K/AKT/mTOR, evidenciado pela redução da fosforilação de AKT (Ser 473), mTOR (Ser 2448), EBP1 (Thr 70), PDK1, p70s6k (Ser 424 Thr 421). Também observamos aumento da ativação de PTEN (redução de p-PTEN Ser 380). Interessantemente, o tratamento combinado de EHT-1864 e daunorrubicina foi significativamente mais efetivo que os tratamentos dos fármacos sozinhos na redução da apoptose e redução da viabilidade celular.

Resultados anteriores de nosso grupo mostraram que o tratamento com EHT-1864 induz os processos de apoptose e autofagia, bem como parada no ciclo celular de células leucêmicas. Os achados deste estudo indicam que estes efeitos podem ser pelo menos parcialmente explicados pela inibição da via PI3K/AKT/mTOR. A potencialização dos efeitos do tratamento com daunorrubicina em células leucêmicas sugere que o tratamento combinado é uma opção terapêutica interessante para ser melhor explorada em estudos futuros.

A inibição farmacológica de proteínas Rac através de EHT-1864 inibiu a via PI3K/AKT/mTOR em células leucêmicas. O tratamento in vitro combinado de EHT-1864 e baixas doses de daunorrubicina potencializou a apoptose de células OCI-AML3. Financiamento: FAPESP.