As neoplasias mieloproliferativas Philadelphia-negativas (NMP) caracterizam-se pela exacerbada mieloproliferação e resistência a apoptose. No presente trabalho foi investigado o efeito da superexpressão do gene LATS2 da via Hippo na proliferação e morte celular da linhagem HEL 92.1.7, portadora da mutação JAK2V617F. A via Hippo, descrita como supressora de tumor, participa da regulação da morte, proliferação e diferenciação celular. A proteína LATS2 atua na regulação do ciclo celular induzindo a parada do ciclo celular na fase G2/M). Assim sendo, células humanas da linhagem HEL.92.1.7 JAK2V617F positiva (ATCC®TIB-180™), oriundas de paciente com PV que progrediu para leucemia mieloide aguda foram transfectadas por eletroporação (250 V; 950 μF) por meio do BioRad GenePulser Xcell com o plasmídeo pClneoMyc-LATS2 (HEL 92.1.7 LATS2) ou com o plasmídeo pcDNA3.1 como controle (MOCK). Após a transfecção, as células foram mantidas em garrafas de 72 cm2 em meio RPMI 10% SBF por 72h, 37°C, 5% CO2, seguidas do tratamento ou não com 10 μM do inibidor de JAK (Jak inhibitor I- Calbiochem - EMD Millipore Corp.). Após tratamento com o inibidor, a morte e a proliferação celular foram avaliadas por citometria de fluxo utilizando anexina-V FITC e corante cell-trace violet (CTV). A superexpressão de LATS2 nas células HEL 92.1.7 transfectadas foi confirmada por meio da quantificação da expressão gênica por RT-PCR em tempo real (p = 0,0500), utilizando a sonda Taqman Hs00324396_m1 e o kit TaqMan gene expression assay (Applied Biosystems®). Após 48 horas do tratamento com inibidor de JAK2 foi observado aumento da apoptose celular nas células que superexpressavamLATS2 em comparação às células MOCK (p = 0,0048). A proliferação das células transfectadas com LATS2, após 24 horas de tratamento, diminuiu em comparação com as células MOCK. Em conjunto, os resultados indicam que, a inibição da via JAK-STAT acompanhada da superexpressão do gene LATS2 foi capaz induzir maior apoptose morte e reduzir a proliferação celular. Em conclusão, este dado sugere que a proteína LATS2 da via Hippo em células JAK2V617 positivas tem função supressora de tumor.

Palavras-chave: Neoplasias mieloproliferativas, Inibidor da via JAK-STAT, via Hippo, Superexpressão gênica e HEL 92.1.7.

Financiamento: CAPES (código 001), CNPq and FAPESP (2018/01756-5; 2018/19714-7; 2018/10711-5).